Cloudvet logo 知识库

红细胞计数(显微镜计数法)

吴礼平 发布于 2017-11-13
导读:红细胞计数,临床上最常用的是改良纽巴计数板,血液经稀释后,充入血细胞计数板,用显微镜观察,计数一定容积内的红细胞数并换算成每升血液内的数目。红细胞数减少见于贫血。红细胞增多可分为相对性增多(浓血症)和绝对性增多。前者主要由于脱水使血液浓缩所致;后者可分为原发性红细胞增多症(真性红细胞增多症,与骨髓增生性疾病有关)和继发性红细胞增多症(与EPO分泌增多有关)。

红细胞计数是血液检查的常规组成部分,有显微镜计数法和自动血细胞分析仪计数法。

  • 显微镜计数法是最基本的红细胞计数法,要求理解其原理并能掌握其操作方法。
  • 血细胞分析仪法是目前临床上最常见、最简单的红细胞计数法,要求掌握其操作要点。

1.原理

血液经稀释后,充入血细胞计数板,用显微镜观察,计数一定容积内的红细胞数并换算成每升血液内的数目。

2.器材与试剂

(1)改良式血细胞计数板:临床上最常用的是改良纽巴(Neubauer)计数板,它由一块特制的玻璃板构成,玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台,两边的平台较中间的平台高0.1 mm。中央平台又有一纵沟相隔,其上各刻有一个计数室

icon血细胞计数板
血细胞计数板
资源描述:临床上最常用的是改良纽巴(Neubauer)计数板,它由一块特制的玻璃板构成,玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台,两边的平台较中间的平台高0.1 mm。中央平台又有一纵沟相隔,其上各刻有一个计数室。每个计数室深度为0.1 mm。

每个计数室划分为9个大方格,每一大方格面积为1.0 mm2,深度为0.1 mm。

  • 四角每一大方格划分为16个中方格,为计数白细胞用
  • 中央一大方格用双线划分为25个中方格,每个中方格又划分为16个小方格,共计400个小方格,此为红细胞计数之用。
icon血细胞计数板中一个计数室全貌
血细胞计数板中一个计数室全貌
资源描述:每个计数室划分为9个大方格,四角每一大方格(浅灰色,L所指)划分为16个中方格,为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格,每个中方格又划分为16个小方格,共计400个小方格,此为红细胞计数之用。

(2)盖玻片:专用于计数板的盖玻片呈长方形,厚度为0.4 mm。

(3)红细胞稀释管或沙利吸血管:5ml吸管、中试管。

(4)显微镜

(5)计数器

(6)稀释液:0.85%氯化钠溶液。

3.操作方法

(1)稀释

用5 ml吸管吸取红细胞稀释液3.98 ml置于试管中。用沙利吸血管吸取全血样品至20 μL刻度处。擦去吸管外壁黏附的血液,将血液吹入试管底部,再吹、吸数次,以洗净沙利管内黏附的血细胞,然后试管颠倒混合数次

(2)充液

用毛细吸管吸取已稀释好的血液,放于计数室与盖玻片接触处,让血液稀释液自然流入计数室中静置1~2 min。

icon血细胞计数板的加样方法
血细胞计数板的加样方法
资源描述:用毛细吸管(或玻棒)吸取已稀释好的血液,放于计数室与盖玻片接触处,即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少,过多则溢出而流入两侧槽内,过少则计数池中形成气泡,致使无法计数。

注意充液不可过多或过少,过多则溢出而流入两侧槽内,如果溢出血细胞计数室应清洁后重新加样;过少则计数池中形成气泡,致使无法计数。

(3)计数

先用低倍镜,光线要稍暗些,找到计数室的格后,把中央的大方格置于视野之中,然后转用高倍镜

icon显微镜低倍镜下所见计数室左上角的白细胞计数大方格
显微镜低倍镜下所见计数室左上角的白细胞计数大方格
资源描述:四角每一大方格划分为16个中方格,为计数白细胞用。

在中央大方格内选择四角与最中间的五个中方格(或用对角线的方法数五个中方格),每个中方格有16个小方格,所以共计数80个小方格。

icon红细胞计数区
红细胞计数区
资源描述:计数室中央一大方格用双线划分为25个中方格,每个中方格又划分为16个小方格,共计400个小方格,此为红细胞计数之用。
icon计数室红细胞计数区域
计数室红细胞计数区域
资源描述:计数室中央一大方格用双线划分为25个中方格(每个中方格又被划分为16个小方格),红细胞计数时需要选择其中5个中方格进行计数。5个中方格选择的方法:①四角4个中方格和中央1个中方格;②沿对角线的5个中方格。这里演示的是第①种(5个中方格已经用红色做了标记)。
icon红细胞计数时的一个视野
红细胞计数时的一个视野
资源描述:高倍镜下可见每个中方格(双线边框)又划分为16个小方格,红细胞散落其中。计数时注意压在左边双线上的红细胞记在内,压在右边双线上的红细胞则不计数在内;同样,压在上线的计入,压在下线的不计入,此所谓“数左不数右,数上不数下”的计数法则。

计数时注意压在左边双线上的红细胞计在内,压在右边双线上的红细胞则不计数在内;同样,压在上线的计入,压在下线的不计入,此所谓“数左不数右数上不数下”的计数法则。

icon红细胞计数方法
红细胞计数方法
资源描述:计数时为避免看错行,应按照“弓”字形路线进行计数。计数时注意:压在左边双线上的红细胞计在内,压在右边双线上的红细胞则不计数在内;同样,压在上线的计入,压在下线的不计入,此所谓“数左不数右,数上不数下”的计数法则。

4.计算

计算公式
X/80×400×200×10=1mm3(1μL)血液中红细胞个数。

公式说明:

  • X——5个中方格(即80个小方格)内的红细胞总数。
  • 400——一个大方格,即1mm2面积内共有400个小方格。
  • 200——稀释倍数。
  • 10——血盖片与计数板的实际高度是1/10mm,乘10后则为1.0mm。
  • 上式简化后为: X × 10000=红细胞数/mm3

将上述计算结果乘以106,即可将单位换算为 个/L。

5.正常参考值

健康动物红细胞数(×1012/L):

  • 犬5.5~8.5;
  • 猫5~10。

6.临床意义

(1)红细胞数减少

红细胞数减少见于贫血。每升血液中红细胞数、血红蛋白量及红细胞压积容量低于正常参考值下限时,称为贫血。按病因可将贫血分为4类:

①失血性贫血:慢性失血性贫血见于胃溃疡、球虫病、钩虫病、捻转胃虫病、螨病、维生素C和凝血酶原缺乏等疾病。急性失血性贫血见于丙酮苄烃香豆素中毒、脾血管肉瘤、犬和猫自体免疫性血小板减少性紫癜、手术和外伤等。

②溶血性贫血:见于牛巴贝西虫病、牛泰勒虫病、钩端螺旋体病、马传染性贫血;绵羊、猪、犊牛的甘蓝中毒和野洋葱中毒;新生骡驹溶血病、犬自体免疫性溶血性贫血等。

③营养性贫血:见于蛋白质趣闻发,铜、铁、钴等微量元素缺乏,维生素B1、B2、B6、B12、叶酸、烟酸缺乏等。

④再生障碍性贫血:见于辐射病、猫泛白细胞减少症、慢性粒细胞白血病、淋巴细胞白血病、垂体功能低下、肾上腺功能低下、甲状腺功能低下等。

(2)相对性增多

主要由于血浆容量减少(脱水)所致,即浓血症,见于腹泻、呕吐、多尿、多汗、肠便秘、急性胃肠炎、肠阻塞、渗出性胸膜炎与腹膜炎、热射病与日射病、某些发热性疾病及犬细小病毒病等传染病。

(3)绝对性增多

原发性增多继发性增多

①原发性红细胞增多症又叫真性红细胞增多症,见于骨髓增生性疾病,一般认为是多能干细胞受损所致。其特点是红细胞持续性显著增多,全身总血量也增加。见于肾肿瘤、雄激素分泌细胞瘤、肾囊肿,红细胞可增多2~3倍。

②继发性红细胞增多症是由于代偿作用而使红细胞绝对数增多,促红细胞生成素EPO)产生过多有关:

  • A.红细胞生成素代偿性增加:因血氧饱和度减低,导致组织缺氧,红细胞生成素增加,骨髓制造红细胞的机能亢进而引起红细胞增多。红细胞增多的程度与缺氧程度成正比。见于高原适应、慢性阻塞性肺病、先天性心脏病(如肺动脉狭窄)、血红蛋白病(如高铁血红蛋白症、硫化血红蛋白症)。
  • B.红细胞生成素病理性增加:红细胞生成素增加与肾脏疾病或肿瘤有关,如肾囊肿、肾积水、肾血管缺陷、肾癌、肾淋巴肉瘤、小脑血管瘤、子宫肌瘤、肝癌等。

7.注意事项

(1)防凝、防溶、取样要正确

红细胞计数是一项细致的工作,稍有粗心大意,就会引起计数不准。关键是防凝防溶取样正确

  • 取抗凝血时,抗凝剂的量要合适,不可过少使血液部分呈小块凝集;采血时应注意及时将抗凝剂与血液混匀
  • 防溶是指防止过分振摇而使红细胞溶解,或是器材用水洗后未用生理盐水冲洗而发生溶血,使计数结果偏低。
  • 取样正确是指吸血10或20µL一定要准确:
    • 吸血管外的血液要擦去;
    • 吸血管内的血液要全部洗入稀释液中;
    • 稀释液的用量要准;
    • 充液量不可过多或过少,过多可使血盖片浮起,过少则计数室中形成小的空气泡,使计数结果偏低甚至无法计数。
  • 此外,显微镜台未保持水平,使计数室内的液体流向一侧,这些操作上的错误均可使计数结果不准确。

(2)器材清洗方法

血细胞计数板用蒸馏水冲洗后,用绒布轻轻擦干即可,切不可用粗布擦拭,也不能用酒精、乙醚等溶液冲洗。

15993
阅读
0
评论
--
6
0
2
收藏