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皮肤病检验技术:皮肤病料采集与压片制备

吴礼平 发布于 2017-12-21
导读:皮肤病料的采集方法主要有:①透明胶带法:临床使用较少,主要用于怀疑姬螯螨的感染病例;②压迫涂片法:适用于有渗出的病灶,如丘疹、脓疱;③直接涂片:主要用于耳道、阴道、脓包、口腔、有渗出物的病灶;④皮肤刮片。病料采集后,制作涂片或压片,可进行透明化后不经染色直接镜检(适用于寄生虫检查),或染色后镜检(适用于细菌和真菌检查)。

宠物皮肤病的病因多种多样,细菌、真菌、寄生虫,甚至内分泌因素都可能引起皮肤病。皮肤病常见的症状有脱毛、瘙痒、红疹、疱疹等,往往缺乏特异性,单纯依靠临床症状难以准确做出诊断,因此实验室诊断是减少误诊和漏诊的重要方法,同时对皮肤病的用药及护理也具有十分重要的指导意义。

一、病料采集方法

 皮肤病料的采集方法主要有:

  • 透明胶带法:临床使用较少,主要用于怀疑姬螯螨的感染病例;
  • 压迫涂片法:适用于有渗出的病灶,如丘疹、脓疱;
  • 直接涂片:主要用于耳道、阴道、脓包、口腔、有渗出物的病灶;
  • 皮肤刮片:较为常用

一、透明胶带法采集病料

  • 利用平常的透明胶带裁剪成载玻片大小。
  • 直接去粘取病灶上的皮屑。
  • 将粘取病料的透明胶带直接粘在载玻片上镜检即可。
  • 临床中比较少用,主要用于怀疑姬螯螨病的检查中。
icon使用透明胶带采集皮肤病料
使用透明胶带采集皮肤病料
资源描述:利用平常的透明胶带裁剪成载玻片大小,直接去粘取病灶上的皮屑。将粘取病料的透明胶带直接粘在载玻片上镜检。临床中比较少用,主要用于怀疑姬螯螨病的检查中。

二、压迫涂片法采集皮肤病料

适用于有渗出的病灶,如丘疹、脓包。挤压病灶,当有结痂或是干性丘疹时取出结痂后再挤压,直接用载玻片粘取病料,风干,染色,镜检。注意尽量避免大量的血液出现。

icon压迫涂片法采集皮肤病料
压迫涂片法采集皮肤病料
资源描述:压迫涂片法适用于有渗出的病灶,如丘疹、脓疱等。挤压病灶,当有结痂或是干性丘疹时可取出结痂后再挤压,然后直接用载玻片粘取病料,风干,染色,镜检。注意尽量避免大量的血液出现。

三、直接涂片法采集病料

用棉签采集所需要的病料,在载玻片上滚动使病料均匀的粘附于载玻片上,风干染色,镜检。主要用于耳道、阴道、脓包、口腔、有渗出物的病灶。

icon直接涂片法采集耳道内病料
直接涂片法采集耳道内病料
资源描述:用棉签采集所需要的病料,在载玻片上滚动使病料均匀的粘附于载玻片上,风干染色,镜检。主要用于耳道、阴道、脓疱、口腔以及有渗出物的病灶。

四、皮肤刮片

分为浅刮和深刮。剪去采样部位的长毛,将一滴甘油(或矿物油)滴在废旧的手术刀片或病灶之上,挤压皮肤持刀片垂直于皮肤顺毛流方向反复刮取。刮取的病料会粘附于甘油之上,收集病料直接压片镜检,当甘油量少时可适量添加。

icon皮肤刮片操作方法
皮肤刮片操作方法
资源描述:将一滴甘油滴在废旧的手术刀片或病灶之上,挤压皮肤持刀片垂直于皮肤顺毛流方向反复刮取,直至渗血。刮取的病料会粘附于甘油之上,收集病料直接压片镜检,当甘油量少时可适量添加。
icon将手术刀片钝的一端浸入矿物油(或甘油)中
将手术刀片钝的一端浸入矿物油(或甘油)中
资源描述:皮肤刮片操作:将手术刀片钝的一端浸入矿物油或甘油中。
icon在刮片前挤压皮肤
在刮片前挤压皮肤
资源描述:皮肤刮片操作:在刮片前挤压皮肤。
icon对皮肤进行刮片
对皮肤进行刮片
资源描述:对皮肤进行刮片,直至出现血清渗出或毛细血管渗血。
icon将病料涂布到载玻片上
将病料涂布到载玻片上
资源描述:将刮取的样本涂布到载玻片上的矿物油(或甘油)中,并盖上盖玻片。

注意事项:

  • 深刮常要见血,所以操作之前需和宠物主人说明。
  • 刮片部位由所要找的螨虫类型决定。应熟悉不同螨虫常见的感染部位。
  • 检查螨虫时,不要在病变部位的中心区采集病料,而应在病变部位与健康部位的交界处

疥螨常见于身体受压的部位,如跗关节、肘关节,也见于耳缘。大多数感染犬有极度瘙痒症状。

icon犬疥螨的多发部位
犬疥螨的多发部位
资源描述:疥螨常见于身体受压的部位,如跗关节、肘关节,也见于耳缘。大多数感染犬有极度瘙痒症状。

犬局灶性蠕形螨感染常见于面部(尤其是口、鼻周围)或爪部,而全身性感染则可能见于任何部位。蠕形螨经常深入毛囊内而被称为“毛囊虫”,因此刮片检查前应挤压皮肤。

icon犬蠕形螨的多发部位
犬蠕形螨的多发部位
资源描述:犬局灶性蠕形螨感染常见于面部或爪部,而全身性感染则可能见于任何部位。

二、压片制备:透明化及染色

一般情况下,皮肤样品的检验须同时进行透明化后镜检和染色后镜检,因此,病料涂片应至少准备2份。

  • 用于染色后镜检的涂片,主要用于检验细菌真菌等,其涂层应较薄,以便于观察;
  • 用于透明化后镜检的涂片,主要用于检查寄生虫,稍厚的涂层有利于虫体的集中,以减少观察工作量。

1.透明化

采集好的皮肤病料,若不经任何处理而直接镜检,则视野中会有大量折光不均匀的斑驳皮屑团块,难以清晰地检出寄生虫。因此,皮肤病料应进行透明化处理后再进行镜检。

透明化处理方法主要有2种:KOH透明化油化透明化

①KOH透明化:在涂片上滴加1~2滴10%KOH,压上盖玻片后轻微加热。

②油化透明化:在涂片上滴加1滴矿物油(如石蜡油)或甘油,也可用显微镜镜头油或植物油,轻微加热,也可不加热。若加热,透明化程度更好,有时显微镜下课只见到螨虫的几丁质外壳,而基本见不到动物皮肤细胞等,非常便于观察。

注意,对于含水分很多的样品,油化透明化效果可能不如KOH法。

2.染色

皮肤图片染色的方法与血涂片染色基本相同,但滴加蒸馏水后静置时间应缩短至30s以内。皮肤病患犬常出现皮脂腺分泌过多,导致涂片油腻,妨碍染色,此时可适当延长滴加染液及滴加蒸馏水后的静置时间。必要时,可先在涂片上滴加石油醚以脱脂,再进行染色。

icon皮肤刮削物未透明化和透明化后效果对比
皮肤刮削物未透明化和透明化后效果对比
资源描述:犬皮肤刮削物镜检效果。左:未透明化(100×),视野中央的疥螨被皮屑遮盖或沾染过多皮屑而难以分辨;右:油化透明化(100×),经过透明化后,皮屑变得透明,视野中央的疥螨即使被皮屑遮盖也能清晰可辨。

三、注意事项

皮肤被细菌真菌感染时,局部常出现面积较大的脱毛、皮屑、渗出等。细菌多在毛发、角质层等处聚集,真菌多聚集在角质层及角质层下。所以,对于怀疑是细菌和真菌感染的病例,重点应放在采取皮屑,取样达到角质层即可,不必过分追求深度

等是皮肤寄生虫感染的常见病因。疥螨寄生在皮下的隧道中,蠕形螨常在毛囊中或皮表,其所在区域常出现皮肤脱毛或红色小丘疹等标志。对此类病例,取样范围可局限在丘疹等标志附近,在深度上应保证达到真皮,稍出血即可,面积不宜过大。

皮肤取样时,用利刀的尖部小面积刮取容易取得较多皮屑,既可保证取样的深度, 又不至于造成过大过深的伤口,不引起大面积出血,取样部位的皮肤易于复原,且皮样中只含少量红细胞,对镜检的干扰小(红细胞难于透明化)。

如刀片较钝,往往非反复、用力刮皮而不能取得皮屑,常使采样局部呈现皮肤光亮、皮下出血,类似刮痧后的表现。此时若继续粗暴刮取,可将取样部位的表皮层全部刮脱,使皮肤出现较大、较深的破损,易导致瘢痕形成;且刮得的样品中含大量的红细胞,妨碍镜检。临床上时而见到此类皮损病例,可见瘢痕处色白,无毛发生长。畜主对此常有异议。

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