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宠物病料的采集、包装与送检

吴礼平 发布于 2018-05-21
导读:宠物病料的采取、保存、包装和记录的方法。
准备工作

训练目标:结合病例诊断工作,学会被检宠物病料的采取、保存、包装和记录的方法。

设备材料

  • (1)器材:煮沸消毒器、外科刀、外科剪、镊子、试管、平皿、广口瓶。包装容器、注射器、采血针头、脱脂棉、载玻片、酒精灯、火柴等。
  • (2)药品:保存液、来苏儿等。
  • (3)新鲜动物尸体。

场地:传染病实验室、宠物医院。

1.病料的采取

(1)剖检前检查

发现犬急性死亡且天然孔出血时,先用显微镜检查其末梢血液抹片中是否有炭疽杆菌存在。如疑为炭疽,则不可随意剖检,只有在确定不是炭疽时方可进行剖检。

(2)取材时间

内脏病料的采取,必须死亡后立即进行,夏天不宜迟于6~8hr,冬天不迟于24hr,否则时间过长,有肠内细菌侵入,易使尸体腐败,影响病原微生物的检出。

取得病料后,应立即送检。如不能立刻进行检验,应迅速存放于冰箱中。若需要采血清测抗体,最好采发病初期和恢复期两个时期的血清。

(3)器械的消毒

  • 刀、剪、镊子、注射器、针头等煮沸消毒30min。
  • 器皿(玻璃制品、陶制品、珐琅制品等)可用高压灭菌或干烤灭菌。
  • 软木塞、橡皮塞置于0.5%石炭酸水溶液中煮沸10min。

采取一种病料,使用一套器械和容器,不可混用

(4)病料的采取

应根据不同的传染病,相应的采取该病常侵害的脏器或内容物。如:

  • 败血性传染病可采取心、肝、睥、肺、肾、淋巴结、胃、肠等;
  • 肠毒血症采取小肠及其内容物;
  • 神经症状的传染病采取脑、脊髓等。

如无法估计是哪种传染病,可进行全面采取。

检查血清抗体时,采取血液,凝固后析出血清,将血清装入灭菌小瓶送检。为了避免杂菌污染,病变检查应待病料采取完毕后再进行。

各种组织及液体的病料采取方法如下:

①内脏及淋巴结

将淋巴结、肺、肝、睥及肾等有病变的部位各采取1~2cm3的小方快,分别置于灭菌的试管或平皿中。若为供病理组织切片的材料,应将典型病变部分及相连的健康组织一并切取,组织块的大小每边约2cm左右,同时要避免金属器械,尤其是当病料供色素检查时更应注意。

②液体性病料

脓汁:用灭菌的注射器或吸管抽取或吸出脓肿深部的脓汁,置于灭菌试管中。若为开口的化脓灶或鼻腔时,则用无菌棉签浸蘸后,放在灭菌的试管中。

血清:以无菌操作吸取血液10ML,置于灭菌试管中,待血液凝固(经1~2hr)析出血清后,吸出血清置于另一灭菌试管中,如供血清学反应时,可于每毫升中加入5%的石炭酸水溶液1~2滴。

全血:采取10ML全血,立即注入盛有5%柠檬酸钠1ML的灭菌试管中,搓转混合片刻后即可。

心血:心血通常在右心房处采取,先用烧红的铁片或刀片烙烫心肌表面,然后用灭菌的尖刃外科刀自烙烫处刺一小孔,再用灭菌吸管或注射器吸出血液,盛于灭菌试管中。

乳汁:乳房先用消毒药水洗净(取乳者的手亦应先消毒),并把乳房附近的毛用消毒液刷湿,最初所挤的乳汁弃去,然后再采集5ML乳汁于灭菌试管中。若仅供显微镜直接染色检查,则可于其中加入0.5%的福尔马林溶液。

胆汁:先用烧红的刀片或铁片烙烫胆囊表面,再用灭菌的吸管或注射器刺入胆囊内吸取胆汁,盛于灭菌的试管中。

③肠

用烧红的刀片或铁片将欲采取的肠表面烙烫后穿一小孔,持灭菌棉签插入肠内,以便采取肠管黏膜或其内容物;亦可用线扎紧一段肠管(约6cm)两端,然后将两端切断,置于灭菌的器皿内。

④皮肤

取大小约10cm×10cm的皮肤一块,保存于30%甘油缓冲溶液中,或10%饱和盐水溶液中,或10%福尔马林溶液中。

⑤胎儿

将流产后的整个胎儿,用塑料薄膜、油布或数层不透水的油纸包紧,装入木箱内,立即送往实验室。

⑥小宠物

将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中,装入木箱内,送往实验室。

⑦骨

需要完整的骨头标本时,应将附着的肌肉和韧带等全部除去,表面撒上食盐,然后包于浸过5%石炭酸水或0.1%升汞溶液的纱布或麻布中,装于木箱内送往实验室。

⑧脑、脊髓

如采取脑、脊髓作病毒检查,可将脑、脊髓浸入50%甘油盐水液中或将整个头部割下,包入浸过0.1%升汞液的纱布或油布中,装如入木箱或铁桶中送检。

⑨粪尿

以清洁玻璃棒蘸新鲜粪便少许,置小瓶内,或用棉拭子自直肠内取少许。用导尿管无菌采取尿液10~20ML,立即送检。

⑩供显微镜检查用的脓汁、血液及黏液

可用载玻片制成抹片,组织块可制成触片,然后在两块玻片之间靠近两端边沿处各垫一根火柴棍或牙签,以免抹片或触片上的病料互相接触。如玻片有多张,可按上法依次垫火柴棍或牙签重叠起来,最上面的一张的玻片上的涂、抹面应朝下,最后用细线包扎,玻片上应注明编码,并另附说明。

2.病料的保存

病料采取后,如不能立即检验,或需送往有关单位检验,应当加入适当的保存剂,使病料尽量保持新鲜状态。

(1) 细菌检验材料的保存

将采取的脏器组织块,保存于饱和的氯化钠溶液或30%甘油缓冲盐水溶液中,容器加塞封固。如系液体,可装在封闭的毛细玻管或试管运送。
饱和氯化钠溶液的配制法:蒸馏水100ML,氯化钠38~39g,充分搅拌溶解后,用数层纱布过滤,高压灭菌后备用。

30%甘油缓冲溶液的配制法:中性甘油30ML,氯化钠0.5g,碱性磷酸钠1.0g,加蒸馏水至100ML,混合后高压灭菌备用。

(2) 病毒检验材料的保存

将采取的脏器组织块,保存于50%甘油缓冲盐水溶液或鸡蛋生理盐水中,容器加塞封固。

50%甘油缓冲盐水溶液的配制法:氯化钠2.5g,酸性磷酸钠0.46g,碱性磷酸钠10.74g,溶于100ML中性蒸馏水中,加纯中性甘油150ML,中性蒸馏水50ML,混合分装后,高压灭菌备用。

鸡蛋生理盐水的配制法:先将新鲜的鸡蛋表面用碘酒消毒,然后打开将内容物倾入灭菌容器内,按全蛋9份加入灭菌生理盐水1份,摇匀后用灭菌的纱布过滤,再加热至56~58℃ 持续30min,第二天及第三天按上法再加热一次,即可应用。

(3)病料组织学检验材料的保存

将采取的脏器组织块放入10%福尔马林溶液或95%酒精中固定;固定液的用量应为送检病料的10倍以上。如用10%福尔马林溶液固定,应在24hr后换新鲜溶液一次。严寒季节为防病料冻结,可将上述固定好的组织块取出,保存于甘油和10%福尔马林等量混合液中。

3.病料的包装和运送

病料送往检验室时,在病料容器一一标号详加记录,附病料送检单,该单要复写三份,一份留为存根,两份寄往检验室,待检查完毕,退回一份。

液体病料最好收集在灭菌的细玻璃管中,管口用火焰封闭,注意勿使管内病料受热。将封闭的玻璃管用废纸或棉花包装,装入较大的试管中,再装在木盒中运送。用棉签蘸取的鼻液及脓汁等物,可置于灭菌的试管中,剪取多余的签柄,严密加封,用蜡密封管口,再装入木盒内寄送。

盛装组织或脏器的玻璃容器,包装时力求细致而结实,最好用双重容器。将盛材料的器皿和塞用蜡封口后,置于内容器中,内容器中衬垫缓冲物(如棉花、碎纸等)。

当气候温暖时,须加冰块,没有冰块时加冷水和等量的硫酸铵搅拌,使之迅速溶解,可使水温降至零下。再将内容器置于外容器中,外容器内应置于废纸、木屑、石灰粉等,再将外容器密封好。内外容器中所加缓冲物之量,以盛病料的容器万一破碎时能完全吸收其液体为度。外容器上需注明上下方向,写明“病理材料”、“小心玻璃”标记。也可用广口保暖瓶盛装病料寄送。

当怀疑为危险传染病(炭疽、禽流感)的病料时,应将盛病料的器皿于金属匣内,将匣焊封加印后装入木匣寄送。

病料装入容器内至送到检验部门的时间越快越好。途中避免接触高热及日光,避免振动、冲撞,以免腐败或病原菌死亡。远途可航空托运,电告检验单位即时提取。血清学和病理组织学检验材料,可妥善包装后邮寄。

注意事项
  1. 采取微生物检验材料时,要严格按照无菌操作手续进行,并严防散布病原。
  2. 要有秩序地进行工作,注意消毒,严防本身感染及造成他人感染。
  3. 正确地保存和包装病料,正确填写送检单。
  4. 通过对流行病学、临诊病状、剖检材料的综合分析,慎重提出送检目的。
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